醫(yī)用消毒機(jī)-醫(yī)療器械滅菌效果監(jiān)測(cè)應(yīng)在在滅菌處理后，存放有效期內(nèi)進(jìn)行無(wú)菌檢驗(yàn)。無(wú)菌檢驗(yàn)應(yīng)在潔凈度為100級(jí)單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行，應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，避免微生物污染。

一、準(zhǔn)備1，洗脫液與培養(yǎng)基無(wú)菌性試驗(yàn):無(wú)菌試驗(yàn)前3d，于需-厭養(yǎng)培養(yǎng)基與霉菌培養(yǎng)基內(nèi)各接種1ml洗脫液，分別置30℃～35℃與20℃～25℃培養(yǎng)72h，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。 2，陽(yáng)性對(duì)照管菌液制備: ①在試驗(yàn)前一天取金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]的普通瓊脂斜面新鮮培養(yǎng)物，接種1環(huán)至需-厭氧培養(yǎng)基內(nèi)，在30℃～35℃培養(yǎng)16h～18h后，用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液稀釋至10cfu/ml～100cfu/ml; ②取生孢梭菌[CMCC(B)64941]的需氧菌、厭氧菌培養(yǎng)基新鮮培養(yǎng)物1接種環(huán)種于相同培養(yǎng)基內(nèi)，于30℃～35℃培養(yǎng) 18h～24h后，用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液稀釋至10cfu/ml～100cfu/ml; ③取白色念珠菌[CMCC（F）98001]真菌瓊脂培養(yǎng)基斜面新鮮培養(yǎng)物1接種環(huán)種于相同培養(yǎng)基內(nèi)，于20℃～25℃培養(yǎng) 24h后，用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液稀釋至10cfu/ml～100cfu/ml。

二、取樣對(duì)縫合針、針頭、刀片等小件醫(yī)療器械直接取樣品各一件分別浸入6管需-厭氧培養(yǎng)管(其中一管作陽(yáng)性對(duì)照)與4管霉菌培養(yǎng)管。培養(yǎng)基用量為15ml/管。對(duì)注射器5副，用5ml洗脫液中反復(fù)抽吸5次，混和后接種需-厭養(yǎng)菌培養(yǎng)管(共6管，其中1管作陽(yáng)性對(duì)照)與霉菌培養(yǎng)管(共4管)。 接種量：1ml注射器為0.5ml，2ml注射器為1ml，5ml～10ml 注射器為2ml，20ml～50ml注射器為5ml,培養(yǎng)基用量：接種量2ml以下為15ml/管，5ml為40ml/管。對(duì)手術(shù)鉗、鑷子等大件醫(yī)療器械，取2件用沾有無(wú)菌洗脫液的棉拭子反復(fù)涂抹采樣，將棉拭子投入5ml無(wú)菌洗脫液中，將采樣液混勻，接種于需-厭氧培養(yǎng)管(共6管，其中1管作陽(yáng)性對(duì)照)與霉菌培養(yǎng)基(共4管)。接種量為1ml/管, 培養(yǎng)基用量為15ml/管。

三、培養(yǎng)在待檢樣品的需-厭氧培養(yǎng)管中，接種預(yù)先準(zhǔn)備的金黃色葡萄球菌陽(yáng)性對(duì)照管1:1000稀釋1ml，將需-厭氧培養(yǎng)管以及陽(yáng)性與陰性對(duì)照管均于30℃～35℃培養(yǎng)5d，霉菌培養(yǎng)管與陰性對(duì)照管于20℃～25℃培養(yǎng)7d，培養(yǎng)期間逐日檢查是否有菌生長(zhǎng)，如加入供試品后培養(yǎng)基出現(xiàn)混濁或沉淀，經(jīng)培養(yǎng)后不能從外觀上判斷時(shí)，可取培養(yǎng)液轉(zhuǎn)種入另一支相同的培養(yǎng)基中或斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)48h～72h后，觀察是否再現(xiàn)混濁或在斜面上有無(wú)菌落生長(zhǎng)，并在轉(zhuǎn)種的同時(shí)，取培養(yǎng)液少量，涂片染色，用顯微鏡觀察是否有菌生長(zhǎng)。

四、結(jié)果判定陽(yáng)性對(duì)照在24h內(nèi)應(yīng)有菌生長(zhǎng)，陰性對(duì)照在培養(yǎng)期間應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)，如需-厭氧菌及霉菌培養(yǎng)管內(nèi)均為澄清或雖顯混濁但經(jīng)證明并非有菌生長(zhǎng)，判為滅菌合格；如需-厭氧菌及霉菌培養(yǎng)管中任何1管顯混濁并證實(shí)有菌生長(zhǎng)，應(yīng)重新取樣，分別同法復(fù)試2次，除陽(yáng)性對(duì)照外，其他各管均不得有菌生長(zhǎng)，否則判為滅菌不合格。五、注意事項(xiàng)1，送檢時(shí)間不得超過(guò)6h，若樣品保存于0℃～4℃，則不得超過(guò)24h。2，被采樣本表面積＜100cm2取全部表面；被采樣本表面積≥100cm2，取100cm2。 3，若消毒因子為化學(xué)消毒劑,采樣液中應(yīng)加入相應(yīng)中和劑。

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